Исследователи-биологи БФУ им. И. Канта совершенствуют методы диагностики неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП). Согласно статистике, заболевание, при котором жир накапливается в клетках печени, наблюдается у каждого третьего человека. Основные факторы риска — несбалансированное питание, избыточный вес и диабет. Отсутствие лечения может постепенно привести сначала к воспалению и стеатогепатиту, затем к фиброзу, циррозу и, как следствие, раку печени. Как правило, заболевание протекает бессимптомно. Первые признаки жировой болезни печени человек испытывает только при запущенной стадии, когда переход на сбалансированное питание уже не помогает и необходимо начать серьезное медикаментозное лечение.  На сегодняшний день, биопсия ткани печени — единственный однозначный способ диагностики данного заболевания. Однако проведение биопсии связано с рядом побочных эффектов (кровотечение, анестезия, послеоперационная реабилитация и др).Усугубляет положение и длительный процесс постановки диагноза. От биохимического анализа крови до узи, МРТ и биопсии могут пройти недели.

Значительно сократить время и усовершенствовать методы диагностики предлагают сотрудники Центра иммунологии и клеточных биотехнологий. 

«Перед нами стоит задача разработки высокоточного способа диагностики, основанного на анализе крови пациентов. Метод включает разработку специальной количественной шкалы измерений для ранней диагностики патологии. Мы разрабатываем и усовершенствуем три относительно доступных лабораторных анализа на основе молекулярно-генетических маркеров в крови пациентов: биохимический анализ крови, иммуноферментный анализ и ПЦР (полимеразная цепная реакция) — ключевой экспериментальный метод для детекции молекул микроРНК. Именно последний метод поможет с высокой специфичностью диагностировать и выявить патологию в печени», — рассказала научный сотрудник Центра иммунологии и клеточных биотехнологий Дарья Скуратовская.

Kantiana.ru представляет научный фоторепортаж о методах, используемых для разработки способа диагностики неалкогольной жировой болезни печени.

Исследования проводятся на биологических образцах от больных пациентов и здоровых добровольцев. Помимо полной клинической информации и анамнеза, пациенты сдают биоматериал в ходе плановых операций. Для долгосрочного хранения биоматериалы (кровь, биоптаты печени и жира) от пациентов хранятся в жидком азоте в специальных контейнерах, при температуре около -196°C градусов.

6R1A1683_.jpg

Пробирка с образцом биоматериала в жидком азоте.

6R1A1713_.jpg    6R1A1784.jpg

Для самого метода диагностики необходимо исследовать кровь. Пробирки с кровью помещают в центрифугу для разделения на сыворотку и клетки крови. Именно в плазме содержатся анализируемые белки, ферменты и микроРНК.

6R1A1486.jpg

Сыворотка и клеточные элементы крови после разделения в центрифуге. Образцы помещены в пробирки для дальнейшего анализа или хранения.

6R1A1499.jpg

Первый метод диагностики — биохимический анализ крови. Полученную плазму в пробирках загружают в биохимический анализатор для общей оценки работы внутренних органов, в том числе печени.

6R1A1517.jpg

Ученый производит иммуноферментный анализ провоспалительных факторов в крови. Так ученые получают детальную картину о содержании белков и пептидов в плазме крови. Количественные показатели выводятся на экран монитора.

6R1A1533.jpg

Ключевой экспериментальный метод ПЦР для определения микроРНК в плазме крови пациентов.При жировой инфильтрации печени (ожирении или несбалансированном питании) развивается воспаление в органе. Специфические для печеночной ткани микроРНК, вследствие воспаления, попадают в кровяное русло. Уровень экспрессии микроРНК позволит поставить диагноз.

6R1A1642.jpg

6R1A1752.jpg    6R1A1758.jpg

Для повышения специфичности и информативности вышеперечисленных методов, которые будут использованы для диагностики неалкогольной жировой болезни печени, в рамках исследования ученые анализируют другие типы тканей от пациентов.

6R1A1831.jpg

Иммунные клетки крови характеризуются на проточном цитометре, позволяющем исследовать клетки крови по таким показателям, как размер, гранулярность, оценить соотношение клеток (лейкоцитов, моноцитов и т.д.) в крови.

6R1A1570.jpg

6R1A1562.jpg    6R1A1593.jpg

Для составления групп сравнения (здоровые доноры и пациенты с НАЖБП) необходимо подтверждение наличия/отсутствия НАЖБП, которое проводится с помощью  гистологического анализа биоптатов печени. Данная методика проводится в кооперации с Научно-практической лабораторией иммуногистохимической и патологоанатомической диагностики.

6R1A1634.jpg    6R1A1601.jpg

Гистологические препараты печени:
рис. 1 - здоровая печень
рис. 2 - неалкогольная жировая болезнь печени, крупные белые пятна — липидные капли («жир») в клетках печени.

2.png    3.png 

На сегодняшний день, существуют разработки по отдельным маркерам заболевания. Каждый способ диагностики НАЖБП имеет свои преимущества и недостатки. Исследование наших биологов позволит объединить подходы и усовершенствовать диагностику заболевания.

6R1A1666.jpg